胆脂瘤上皮细胞中肿瘤坏死因子受体1的表达及其意义

摘要

目的： 继发性中耳胆脂瘤是一种慢性炎症，其病理表现以胆脂瘤上皮细胞过度增殖、凋亡和邻近骨质的破坏为主要特点。目前，继发性中耳胆脂瘤形成的确切机制尚不清楚，已有研究证实细胞因子(cytokine，CK)在中耳胆脂瘤的形成与发展中有重要作用，不管是胆脂瘤上皮增殖能力改变、骨质破坏吸收加剧、角质碎屑堆积，还是胆脂瘤染色体异常、胆脂瘤信号转导变化都与细胞因子有直接或间接的联系。因此，深入研究细胞因子在继发性中耳胆脂瘤中的具体作用十分重要，是研究清楚继发性中耳胆脂瘤的发病机制中的关键一环。本研究旨在通过检测肿瘤坏死因子受体1(tumour necrosisfactor receptor 1，TNFRl)及caspase-8在继发性中耳胆脂瘤中的表达及蛋白含量，核因子-kB(nuclear factor-kB，NF-kB)在继发性中耳胆脂瘤中的表达及活性，从而探讨它们在胆脂瘤骨质破坏机制中的作用。 方法： 1．采用免疫组化两步法检测TNFR1、caspase-8、增殖细胞核抗原(proliferation cellnuclear antigen，PCNA)及NF-kB分别在36例继发性中耳胆脂瘤上皮、20例继发性中耳胆脂瘤患者外耳道皮肤、15例正常无病变外耳道皮肤上皮细胞中的表达。 2．采用Western Blot法检测TNFR1、caspase-8分别在25例继发性中耳胆脂瘤上皮、25例继发性中耳胆脂瘤患者外耳道皮肤、15例正常无病变外耳道皮肤上皮细胞中的蛋白表达。 3．采用TUNEL法检测16例继发性中耳胆脂瘤上皮、10例继发性胆脂瘤患者外耳道皮肤、10例正常无病变外耳道皮肤上皮细胞中的凋亡细胞的表达。 结果： 1．TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA在中耳胆脂瘤上皮中均有阳性表达，阳性表达率分别为(68.61±5.74)％、(80.14±4.79)％、(50.67±4.44)％及(77.03±4.33)％，其中TNFR1、caspase-8主要位于细胞膜和细胞质，NF-kB及PCNA主要位于细胞核。在中耳胆脂瘤组织中上述因子主要分布在棘层、颗粒层和基底层细胞，角质层细胞表达较弱。而在中耳胆脂瘤患者外耳道皮肤和正常无病变外耳道皮肤中TNFR-1、caspase-8、NF-k B及PCNA阳性细胞明显减少，主要分布在棘层和颗粒层细胞，基底层和角质层的细胞阳性表达较弱。胆脂瘤组织TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA的表达高于胆脂瘤患者外耳道皮肤和正常无病变外耳道皮肤(p<0.05)。胆脂瘤患者外耳道皮肤和正常无病变外耳道皮肤TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA的表达无差别(p>0.05)。 2．凋亡细胞在中耳胆脂瘤上皮、中耳胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤中均有阳性表达，阳性表达率分别为(75.67±4.58)％、(30.52±6.93)％及(31.47±6.36)％，在胆脂瘤上皮中，凋亡细胞存在于棘层、颗粒层和基底层，胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤中凋亡细胞主要分布在基底层，棘层及颗粒层数量明显较少，胆脂瘤上皮细胞的凋亡率显著高于胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤，其差异有显著性意义(p<0.05)，但后两者的凋亡率无显著性差异(p>0.05)。 3．胆脂瘤上皮组织及胆脂瘤患者外耳道皮肤组织中均有TNFR1、caspase-8蛋白的表达，TNFR1蛋白条带的位置在55KD，caspase-8蛋白条带的位置在55.3KD，胆脂瘤患者外耳道皮肤组TNFR1蛋白、caspase-8蛋白表达明显较胆脂瘤上皮组弱，正常无病变外耳道皮肤无TNFR1、caspase-8蛋白的表达。 4．中耳胆脂瘤组织中NF-kB与PCNA及caspase-8与细胞凋亡率之间均有相关性(p<0.05)。 结论： 1．中耳胆脂瘤上皮中TNFR1表达及蛋白含量显著高于胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤组织，提示其参与了继发性中耳胆脂瘤的发病机制。 2．中耳胆脂瘤上皮中caspase-8的表达、蛋白含量及细胞凋亡率显著高于胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤组织，提示caspase-8参与了中耳胆脂瘤上皮细胞过度凋亡的机制。 3．中耳胆脂瘤上皮中NF-kB的活性及PCNA的表达显著高于胆脂瘤患者外耳道皮肤及正常无病变外耳道皮肤组织，提示NF-kB参与了中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖的机制。 4．TNFR1可能激活了NF-kB及caspase-8两条信号转导途径，从而使胆脂瘤上皮细胞存在过度增殖及过度凋亡两种状态，大量增殖的细胞及过度的凋亡，导致角化碎屑的堆积压迫造成骨质破坏。

目录

论文说明：英文缩写词表

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摘要

前 言

第一部分免疫组化法检测TNFR1、caspase-8、NF-κB及PCNA在中耳胆脂瘤的表达

材料与方法

结 果

第二部分中耳胆脂瘤上皮细胞凋亡的检测

材料与方法

结 果

第三部分WesternBlot法检测TNFR1、caspase-8在中耳胆脂瘤的表达

材料与方法

结 果

讨论

全文结论

致 谢

图 片

参考文献

综述中耳胆脂瘤发生机制研究现状及展望

攻读硕士学位期间发表的论文