日粮氧化大豆油对蛋鸡脂代谢抗氧化机能影响的研究

摘要

蛋鸡在产蛋高峰期，体内的脂代谢强度很大。作为动物体生长必需的营养物质和蛋黄的主要成分之一，脂类对于高峰产蛋鸡的生产性能有着举足轻重的影响。日粮中的脂类作为给蛋鸡提供脂类最便捷有效地方式，在国外早已被广泛采用。在我国，蛋鸡生产者越来越意识到油脂对于蛋鸡抗热应激、提高生产性能的作用。因此，油脂在蛋鸡饲料上的应用越来越普遍。但是不容忽视的是，植物油脂在为蛋鸡提供必需脂肪酸，降低脂质生物合成的能量消耗的同时，也存在潜在的隐患，即油脂氧化产物对动物会产生严重负面影响。本研究以高峰产蛋鸡为对象，通过4个试验从氧化还原状态和脂代谢两个主要方面分别探讨了日粮氧化油脂对产蛋鸡的影响。其涉及的方面包括日粮氧化油脂对产蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化酶活性及表达、载脂蛋白表达等情况，并通过肝细胞体外培养方式研究了氧化油对肝脏抗氧化酶、脂代谢调控因子上游细胞因子的影响。
　　 试验一：日粮氧化油脂对产蛋鸡生产性能和蛋品质的影响
　　 本试验旨在探讨不同梯度氧化大豆油以及不同饲喂时间对产蛋鸡表观生产指标的影响。试验用氧化油采用食品级未添加抗氧化剂的新鲜大豆油，经通空气的高温氧化制作而成。选用288只280日龄，产蛋率90％的海兰灰蛋鸡，随机分为4个处理，每个处理6个重复，每个重复12只鸡。分别饲喂含有0、1％、2％和4％氧化大豆油的日粮，试验期为30d，记录和计算1～4周和全期的生产性能，测定0d及1～4周的蛋品质指标。使用单因素方差分析对各时间点的指标进行统计分析。结果表明，添加2％和4％氧化大豆油从第1周开始就显著增加产蛋鸡料蛋比(P<0.05)，对产蛋率影响不显著(P>0.05)，但采食量有增加趋势(P>0.05)。蛋品质指标影响均不显著，但是蛋白高度和蛋重有下降趋势(P>0.05)。本试验表明，采食2％及4％氧化大豆油会显著降低产蛋鸡生产性能产蛋鸡生产性能的下降主要是由于采食量的增加和平均蛋重的下降所导致。
　　 试验二：日粮氧化油脂对产蛋鸡肝脏和血清氧化还原状态及抗氧化酶基因表达的影响
　　 本试验的目的是研究采食氧化油脂后，产蛋鸡血清和肝脏内氧化产物沉积、抗氧化酶活性和基因表达量的变化。选用288只280日龄，产蛋率90％的海兰灰蛋鸡，随机分为4个处理，每个处理6个重复，每个重复12只鸡。分别饲喂含有0、1％、2％和4％氧化大豆油的日粮，试验期为30d，于试验的0d、2d、6d、14d和30d每个重复屠宰1只鸡，采集血清和肝脏样品，用以测定相关指标。试验表明，采食含有1％氧化大豆油日粮的鸡只，其血清和肝脏中GPX、总SOD和GST的活性都显著增强(P<0.05)；但如果添加量达到2％或4％，则最终显著降低抗氧化酶活性：日粮添加豆油(无论是否氧化)超过14天，都会显著增加蛋鸡血清和肝脏中的MDA含量；氧化豆油的水平达到2％会显著增加肝脏抗氧化酶的基因表达，但如果达到4％，且时间超过14d则会显著降低3种GST同工酶的基因表达。
　　 试验三：日粮氧化油脂对产蛋鸡脂代谢及肝脏载脂蛋白基因表达的影响
　　 本试验旨在探讨日粮中氧化油脂对产蛋鸡脂代谢体系中血清、肝脏和蛋黄脂蛋白、载脂蛋白及相关激素--雌二醇含量或表达量的影响。选用288只280日龄，产蛋率90％的海兰灰蛋鸡随机分为4个处理，每个处理6个重复，每个重复12只鸡。分别饲喂含有0、1％、2％和4％氧化大豆油的日粮，试验期为30d，于试验的0d、2d、6d、14d和30d每个重复屠宰1只鸡，测定腹脂率和肝脏体重比，采集血清和肝脏样品；每个重复收集5枚正常鸡蛋，收集蛋黄，用以测定相关指标。结果显示，日粮添加4％的氧化大豆油达到30天，会显著增加产蛋鸡肝体比和腹脂率(P<0.05)；日粮添加2％的氧化大豆油达到14天，会显著提高产蛋鸡血清VLDL-C的含量(P<0.05)；达到30天会显著降低产蛋鸡血清TG含量(P<0.05)；采食含有2％和4％氧化大豆油日粮的产蛋鸡，其血清雌二醇含量随时间延长而增加。日粮添加2％和4％氧化大豆油会随时间的延长而增加蛋黄中反式脂肪酸的含量，并降低18:3n3的含量；日粮添加2％氧化大豆油达到30天，会显著增加产蛋鸡肝脏apoB-100的基因表达(P<0.05)；添加4％氧化大豆油达到30天会显著增加产蛋鸡肝脏apoVLDL-Ⅱ的基因表达(P<0.05)，并显著抑制apoB-100的基因表达(P<0.05)。
　　 试验四：不同过氧化物对产蛋鸡肝细胞中抗氧化及脂代谢相关信号分子表达量及激活程度的影响
　　 本试验旨在以体外培养的肝细胞为对象，研究氧化油脂、初级氧化产物代表物H2O2以及次级氧化产物代表物HNE对肝脏抗氧化和脂代谢上游信号分子PPARα、LXR、Nrf2、SREBP-1和SREBP-2以及相关靶基因LPL和GSTO1的表达量的影响。试验分别向培养基中添加1.5％氧化大豆油乙醇提取物、1.5％新鲜大豆油乙醇提取物、0.1mM H2O2、1.5％HNE乙醇提取物作为处理因子，以添加1.5％无水乙醇的培养基作为对照组，从贴壁72h开始，对肝细胞进行12h的处理，培养条件为5％CO2，37℃。结果发现培养基添加1.5％氧化油提取物可以极显著增加产蛋鸡肝细胞中SREBP-1和SREBP-2的基因表达量(P<0.05)，显著增加LXR的基因表达量(P<0.05)；添加1.5％的HNE乙醇提取物可以显著提高产蛋鸡肝细胞中SREBP-1、SREBP-2的基因表达量(P<0.05)，显著增加Nrf2和GSTO1的基因表达量(P<0.05)。
　　 总结本系列研究的结果，日粮添加氧化大豆油很可能通过影响脂代谢和抗氧化相关蛋白和酶基因表达来影响产蛋鸡脂代谢和抗氧化系统的正常运转，进而对产蛋鸡的生产性能造成不良影响。