蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）B905趋化性cheA基因的克隆及其定殖相关性

摘要

植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内，并与寄主植物建立和谐联合关系的一类细菌。诸多研究结果表明，部分植物内生细菌对植物是有益的，因此，这部分植物内生细菌的研究已成为国内外研究的热点之一。 蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B905是本实验室从小麦根部分离的一株内生增产防病细菌。它可以在小麦的根围和根内定殖，但其定殖机理目前尚不清楚。本研究从该菌的趋化性cheA基因入手，克隆该基因并采用插入突变方法获得突变菌株，再比较突变株与野生菌株之间的定殖能力的差异，为明确影响细菌定殖的因素做一些初步探索。 从NCBI上获得蜡样芽孢杆菌ATCC 10987的cheA基因序列，通过DNAMAN软件设计引物，以蜡样芽孢杆菌B905的基因组DNA为模板，扩增获得了一条大小为2019bp的片段，测序结果表明该片段为B905菌株cheA基因。根据测序后的cheA基因序列设计用于同源重组的中部片段引物，扩增获得大小为1200bp的片段，并连接到pHSG299载体上，电击转化B905，利用同源重组原理，获得了一个cheA基因的插入突变体。用GFP标记的野生型B905和突变体以浸种法和灌根法分别接种小麦，12天后取小麦的根部，分别测定野生型菌株和突变体在小麦根部的定殖量。激光共聚焦显微镜观察和生物学测定结果表明，突变体在小麦根部的定殖量明显少于野生菌株在小麦根部的定殖量。其中，浸种处理后，菌株在小麦根部的定殖量明显高于灌根处理；当接种量下降时，菌株在小麦根部的定殖量也随之下降。本试验仅只是得到了一些初步结果，至于cheA基因是否在内生定殖阶段发挥多大作用尚不明确，要彻底解析cheA基因与定殖的关系，还需要大量的后续工作。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章引言

1.1植物内生细菌研究进展

1.2芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用

1.3影响细菌定殖的主要因素

1.4细菌趋化性的研究进展

1.5本项研究的目的与意义

第二章蜡样芽孢杆菌B905趋化性基因cheA的克隆

2.1材料

2.2方法

2.3结果与分析

小结

第三章蜡样芽孢杆菌B905 cheA基因突变体的获得

3.1材料

3.2方法

3.3结果与分析

小结

第四章突变体与野生菌株定殖能力的比较

4.1材料

4.2方法

4.3结果与分析

小结

第五章结论与讨论

参考文献

致谢

附录

作者简介