龙须菜硫酸多糖抗食物过敏活性的研究

摘要

食物过敏（Food allergy）是一种常见的过敏性疾病，严重影响着过敏人群的身体健康，引起了各国政府和公众的普遍关注。为了控制过敏发病率的增长，开发新型天然活性组分用以防治食物过敏，引起越来越多学者的关注。龙须菜多糖具有抗肿瘤、抗病毒、缓解低血糖等生物活性。目前关于龙须菜硫酸多糖的抗过敏作用研究尚未见报道，所以研究龙须菜硫酸多糖的抗食物过敏活性，并进一步探究其抗过敏机理，对于开发抗过敏功能食品及新型抗过敏药物具有重要的意义。
　　本研究首先通过热水浸提、低压浓缩、乙醇沉淀等方法从龙须菜中提取得到硫酸多糖粗样，再利用DEAE-cellulose52纤维素柱层析制得高纯度的龙须菜硫酸多糖（sulfated polysaccharide fromGracilarialemaneiformis，GLSP），纯化出的GLSP的分子量为152,481 Da，其主要单糖组分是半乳糖，含量为87.49％，经红外光谱分析，GLSP内部含有3,6-内醚半乳糖和硫酸基团，3,6-内醚半乳糖含量为8.23%，硫酸根的含量为11.26%。
　　通过体外细胞模型研究发现，龙须菜硫酸多糖能够抑制大鼠嗜碱性粒细胞RBL-2H3细胞脱颗粒，且其抑制率与GLSP的硫酸根含量成正比；GLSP能够降低RBL-2H3细胞组胺、活性氧的分泌，抑制其释放过敏相关细胞因子IL-4、TNF-α；能够下调IgE介导的KU812细胞表面抗原CD63、CD203c的表达，并可以降低KU812细胞p38 MAPK磷酸化水平，起到抑制过敏反应中嗜碱性粒细胞激活的活性。
　　龙须菜硫酸多糖能够缓解TM致敏小鼠的过敏反应症状，抑制小鼠血清组胺及小鼠肥大细胞蛋白酶（mMCP）-1的产生；能够抑制Th2细胞因子（IL-4、IL-13）的分泌及Th2转录因子GATA-3的基因表达，促进调节性T细胞（Treg）细胞因子（IL-10、TGF-β）的分泌及Treg细胞转录因子Foxp3的基因表达，通过增强Treg细胞功能起到免疫抑制作用，从而起到抑制Th2细胞主导的食物过敏反应的活性；龙须菜硫酸多糖对于食物过敏的预防作用优于治疗作用。
　　综上所述，龙须菜硫酸多糖能够抑制IgE介导的RBL-2H3和KU812的激活与功能，减缓小鼠过敏反应症状，降低小鼠血清中TM特异性IgE和IgG1的水平，促进调节T细胞细胞因子分泌及其转录因子的表达，抑制Th2细胞因子的产生及其转录因子表达，并且可以抑制嗜碱性粒细胞p38 Mitogen-activated protein kinase（MAPK）信号通路的传导。综合体外细胞模型及小鼠模型的实验结果，可以得知龙须菜硫酸多糖能够通过免疫抑制作用及抑制效应细胞p38 MAPK信号通路起到抗食物过敏的活性。

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第1章 引言

1.1 食物过敏及其免疫学机制

1.2 抗食物过敏的评价模型

1.3 抗食物过敏的天然活性组分

1.4 本研究的目的和意义

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

第3章 结果与分析

3.1 拟穴青蟹TM的纯化与鉴定

3.2 龙须菜硫酸多糖的制备与分析

3.3 RBL-2H3细胞模型评价龙须菜硫酸多糖的抗食物过敏活性

3.4 KU812细胞模型评价龙须菜硫酸多糖的抗食物过敏活性

3.5 Balb/c小鼠模型评价龙须菜硫酸多糖的抗食物过敏活性

3.6 龙须菜硫酸多糖对KU812细胞MAPK信号通路的影响

3.7 龙须菜硫酸多糖抗食物过敏构效关系探究

第4章 讨论

4.1 龙须菜硫酸多糖的制备与分析

4.2 龙须菜硫酸多糖对RBL-2H3细胞功能的抑制作用

4.3 龙须菜硫酸多糖对KU812细胞激活的抑制作用

4.4 龙须菜硫酸多糖缓解TM致敏小鼠的过敏反应

4.5 龙须菜硫酸多糖对TM致敏小鼠的免疫抑制作用

4.6 龙须菜硫酸多糖对KU812细胞MAPK信号通路的调节

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

在学期间科研成果情况