CP15亚单位疫苗对小鼠隐孢子虫感染的免疫保护效果研究

摘要

为观察重组表达的CP15抗原对小鼠隐孢子虫感染的免疫保护效果，将重组质粒pET-28a-CP15转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达情况和反应原性。将纯化的重组表达蛋白与弗氏佐剂充分乳化后免疫BALB／c小鼠，观察疫苗诱导的体液、细胞免疫水平及对隐孢子虫感染的免疫保护效果。结果显示，成功表达了隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)CP15基因，Westernblot分析表明制备的重组蛋白具有良好的免疫活性。免疫小鼠血清中特异性抗体IgG水平随免疫次数的增加而增加，在第3次免疫后达到最高，极显著高于对照组(P<0.01);CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率、T淋巴细胞增殖反应、IL-18和IFN-γ分泌水平均极显著高于对照组(P<0.01)。感染后小鼠粪便卵囊的real time PCR检测结果显示，与对照组相比，免疫组小鼠卵囊排出量极显著低于对照组(P<0.01)，减卵率达到99.3％，排卵时间缩短为1d，表明制备的亚单位疫苗免疫后小鼠产生了较强的免疫保护效果。