牛干扰素α基因的改造与可溶性表达研究

摘要

随着奶牛集约化养殖程度不断提高，奶牛病毒性疾病的感染率也在逐年上升牛干扰素α(Bovine interferon-α,BoIFN-α)原始基因在重组大肠杆菌中多以包涵体形式表达,为在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达的具有活性的重组BoIFN-α,在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏好性对BoIFN-α基因进行子优化.将优化后的BoIFN-α成熟蛋白基因分别克隆到表达载体pET-28a、PET30a和pColdⅡ载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.优化后的BoIFN-α基因在3种载体中均获得可溶性表达,但以在载体pColdⅡ中获得的可溶性表达量最高.对重组菌rBoIFN-α-pColdⅡ/BL21的表达条件进行优化,在IPTG浓度为0.64 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为9h的条件下,可溶性目的蛋白的表达量最高,达36 mg/L菌液.重组BoIFN-α在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1×106 U/mg.