重组牦牛肌肉生长抑制素成熟肽的纯化及其免疫原性研究

摘要

肌肉生长抑制素(MSTN)是骨骼肌生长发育的负调控因子,为了探索牦牛MSTN的作用机制,寻找合适的阻断MSTN活性的方法,最终实现牦牛的高效率育肥,本文重组表达了牦牛的MSTN成熟肽,并对其进行了分离、纯化和免疫原性检测。本文采用RT-PCR方法克隆牦牛MSTN成熟肽基因，构建MSTN-pET28a(+)重组表达载体，进而在E.coli BL21 (DE3)宿主菌中进行表达，将表达产物用亲和层析纯化，最后用LISA方法检测牦牛MSTN重组成熟肽的免疫原性.重组载体中连接的牦牛MSTN成熟肽基因,包含330bp,编码109个氨基酸.含MSTN-pET28a(+)重组载体的工程菌经0.1mMIPTG诱导表达6小时后,MSTN成熟肽的表达量约占蛋白总量的21％,总蛋白经亲和层析纯化后得到了高纯度的牦牛MSTN重组成熟肽,分子量约16.5kDa；ELISA结果显示,兔抗牦牛MSTN重组成熟肽的血清效价为32000个抗体单位,表明牦牛MSTN重组成熟肽具有较好的免疫原性.本研究建立了牦牛MSTN重组成熟肽高效表达系统并纯化获得具有免疫原性的牦牛重组MSTN成熟肽,这为通过调控MSTN功能来改良牦牛产肉性能的研究储备了技术条件。