α-乙酰乳酸脱羧酶基因工程菌的构建、高效表达及酶学性质研究

摘要

通过PCR扩增得到a-乙酰乳酸脱羧酶基因saald,将其克隆到表达载体pMA5上，以Bacillus subtilis为表达宿主，构建α-乙酰乳酸脱羧酶基因工程菌，实现了ALDC的高效表达。对重组蛋白进行纯化，获得具有活性的ALDC，并对其酶学性质进行了初步研究，结果表明，其最适pH为6.0，在pH7.0-9.0之间较稳定；最适反应温度为45℃，在35℃以下比较稳定，45℃以上敏感；其Km值和Vmax值分别为0.0177mmol/L和2.06mol/(ml/min)；Sn2+，Zn2+，Fe3+对ALDC活性有明显的抑制。