刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备

摘要

提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/C小鼠,经细胞融合、亚克隆和间接ELISA筛选,制备得到5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7三株单克隆抗体腹水,检测这三株单克隆抗体的亚基份、效价,通过Western blotting验证这三株单克隆抗体的抗原性,通过免疫荧光法对这三株单克隆抗体的作用位点进行定位.结果表明,这三株单克隆抗体亚型均为IgM,5D11AG5株的ELISA效价约为1 ∶ 3200,5H9BG3的ELISA效价为1:25600,6E11CE7 ELISA效价为1:51200; Western-blotting结果显示5D11AG5株和5H9BG3株能够识别变性还原的、大小约为35kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白,而6E11CE7株不能识别变性还原的刺激隐核虫幼虫膜蛋白,判断其识别的是刺激隐核虫幼虫膜蛋白空间构象位点.免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和5H9DG3识别部位主要在虫体前端近胞口处,而单抗6E11CE7识别部位为虫体周边外膜,刺激隐核虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选和功能分析奠定了基础.