鸡白细胞介素-6/2嵌合基因的融合表达及活性研究

摘要

为研究具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将鸡ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化.分别采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应活性,采用MTS法检测其体外促鸡外周血T和脾脏淋巴细胞的增殖活性.结果:成功构建了ChIL-6-1inker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒(rpQE-30/ChIL-6-1inker-ChIL-2),表达的重组融合蛋白分子量约40kD,纯化后的纯度在96％以上.重组融合蛋白可与抗ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞增殖活性和鸡脾脏淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一单重组蛋白对照.本研究初步证明了rChIL-6-1inker-ChIL-2蛋白在鸡体外具有rChIL-6和rChIL-2蛋白的双重生物学活性,为进一步研究rChIL-6-1inker-ChIL-2蛋白在鸡体内活性奠定了基础.