银鲳(Pampus argenteus)胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的克隆和表达分析

摘要

胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)是影响脊椎动物生长、发育及代谢的重要调控因子.本研究采用RT-PCR和RACE技术,克隆了银鲳(Pampus argenteus)肝脏IGF-IcDNA序列,应用半定量RT-PCR、Real-time qPCR和原位杂交的方法检测了IGF-Ⅰ的组织表达特性、在肝脏中的生长表达特性和IGF-Ⅰ基因在肝脏中的定位.序列分析表明,IGF-ⅠcDNA序列全长836bp,开放阅读框605bp,由此推导IGF-Ⅰ前体蛋白由201个氨基酸组成;前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,E肽分析表明,银鲳IGF-Ⅰ属Ea-4型.同源性比较结果表明,银鲳与同目鲈形目鱼类的IGF-Ⅰ编码序列同源性较高,为83.52％～91.40％.半定量RT-PCR和Real-time qPCR组织特异性表达结果显示,IGF-ⅠmRNA在肝脏组织中的表达量最高,显著高于其他组织;半定量RT-PCR和Real-time qPCR不同生长阶段表达结果显示,IGF-ⅠmRNA在30～50g肝脏组织中表达量最高(P＜0.05);IGF-ⅠmRNA在肝脏中的原位杂交定位结果显示,在肝脏细胞中均有表达,阳性信号主要位于细胞质中,靠近细胞边缘处信号较强.