LC-MS/MS法测定大鼠血浆中3种单酯型生物碱

摘要

目的：建立同时测定大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的LC-MS/MS方法. 方法：采用25％氨水碱化血浆样品后用乙酸乙酯液液萃取的方法.色谱条件：色谱柱为Waters SunFire C18柱(2.5μm,50mm×3.00mm),乙腈-10mmol/L醋酸铵(氨水调pH=9-10)为流动相,梯度洗脱,流速0.3ml·min-1,柱温20°C.质谱条件：采用电喷雾离子化(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM)定量;苯甲酰新乌头原碱[M+H]+：m/z=590.30/105.20;苯甲酰乌头原碱[M+H]+：m/z=604.30/105.00;苯甲酰次乌头原碱[M+H]+：m/z=574.30/105.10;内标草乌甲素[M+H]+：m/z=644.40/584.30. 结果：本方法测定3个单酯型生物碱特异性好;苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱在0.312ng/ml-20.Ong/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9982,0.9953,0.9962 );3个单酯型生物碱低中高三个浓度日内和日间精密度均在15%以内，平均基质效应分别为109.08±6.34% (n=18)、94.86±5.35 (n=18)、107.55±6.20(n=18);苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱的提取回收率分别为81.21±6.61% (n=18).82.23±5.14%(n=18 ) , 78.99±5.39%(n=18);3个单酯型生物碱进样溶液低中高浓度室温放置3天、未处理血浆样品室温放置1天、-20°C放置30天，1次及3次冷冻一解冻循环均稳定。 结论：建立的LC-MS/MS方法特异性强、灵敏度高、准确度好，适用于大鼠体内附子(黑顺片)中单酯型生物碱的药代动力学研究。