基于FAdV-4中国流行株间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要

为建立一种客观评价鸡群中FAdV-4流行毒株感染情况和FAdV-4全病毒灭活疫苗免疫后抗体反应的简便、快速和特异的方法,本研究利用纯化的禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株作为包被抗原,建立了检测FAdV-4流行株抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.优化后的反应条件为:抗原的最佳包被量为0.20μg/孔;包被条件为37C1h,然后4°C过夜;血清稀释度为1:800,酶标二抗最适稀释度为1:2000,作用时间为1.5h;TMB作用时间为5min.在优化条件下,样品的S/P值大于或等于0.042时判定为阳性.FAdV-4抗原与抗新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法有较好的特异性;批内和批间重复的最大变异系数分别为3.735％和4.373％,显示该方法具有较好的稳定性,用所建立的ELISA对40份来自于疑似FAdV4感染病鸡的血清样品进行检测,检测结果与FAdV-4病原学检测结果符合率为100％.对我国河南、山东、安徽、山西和江苏等不同地区的676份鸡血清样品进行了FAdV-4感染的血清流行病学调查,结果显示上述省份均存在不同程度的FAdV-4感染,抗体阳性率在69.3-89.1％.