基于FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

为了建立用于禽腺病毒血清4型(FAdV-4)中国流行株的血清流行病学监测方法,本研究利用在大肠杆菌中表达的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白作为包被抗原,建立了检测抗FAdV-4中国流行株抗体的间接ELISA方法.所建立方法的最佳条件为:抗原最适包被量为0.25μg/孔,包被时间为37°C1h,然后4°C过夜;被检血清的最佳稀释度为1:800,作用时间为2h;二抗选用HRP标记的兔抗鸡IgY,稀释度为1:4000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用条件为室温5min.所建立ELISA的判定标准为:样品的S/P值大于或等于0.0553判为阳性,小于0.0418判为阴性.用建立的ELISA方法对抗鸡新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法有较好的特异性,组内和组间重复的最大变异系数为5.6％和5.7％,所建立的ELISA方法重复性良好.用所建立的ELISA方法对50份来自于疑似患肝炎-心包积液综合症病鸡的血清样品进行检测,阳性检出率为98％,与FAdV-4病原学检测结果符合率为100％.结果表明,本研究所建立的ELISA方法可用于抗FAdV-4中国流行株抗体的检测,为肝炎-心包积液综合症病监测和流行病学调查提供了方法.