稳定表达TIGAR基因的MDCK细胞建立及禽流感病毒在其中的增殖特性研究

摘要

1997年香港发生首例H5N1亚型高致病性禽流感病毒感染人的事件,引发了全世界的关注.此后,该亚型病毒在包括中国大陆在内的多个国家和地区相继爆发流行,给全球养禽业造成重大经济损失,同时也使人类的公共卫生安全面临严峻挑战.传统的禽流感重组灭活疫苗通常是通过反向遗传操作技术构建的高产致弱毒株,在SPF鸡胚上扩大增殖培养,灭活乳化后投入使用.但是该种方法生产的疫苗其抗原性与母本毒株存在差异,并且使用鸡胚的固有缺点也严重限制了该方法的发展.MDCK细胞是分离、培养禽流感病毒常用细胞系,因此科研工作者将目光投向以MDCK细胞为基质的禽流感疫苗研发.然而该方法也面临两方面的问题:一是MDCK细胞贴壁性太强,无法适应工业化生产;二是与鸡胚培养相比,禽流感病毒在MDCK细胞上的复制能力较低.TIGAR(TP53-induced glycolysis andapoptosis regulator)基因能够调节糖代谢和细胞凋亡,减少各种应激引起的凋亡,提高细胞存活时间.因此,本文通过建立稳定表达TIGAR基因的MDCK细胞期望解决上述MDCK细胞生产禽流感疫苗的问题.