Cthrc1与TGF-β1对成纤维细胞胶原蛋白合成的影响研究

摘要

目的：转化生长因子-β1(TGF-β1)在各种纤维化疾病中的表达量均上升.TGF-β1由成纤维细胞分泌,可直接作用于成纤维细胞并使其转化为肌成纤维细胞,促进其增殖并合成胶原,诱导纤维连接蛋白等的产生,促进成纤维细胞细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和沉积,提高细胞的收缩功能,抑制蛋白酶和基质酶的活性.细胞外基质的过度表达能够促使细胞过度增生和基质合成.TGF-β1途径被认为是病理性纤维化的核心途径.胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing1,Cthrc1)基因作为一种新型的基因,表达于受损动脉的外膜以及内膜.Cthrc1作为细胞特异性TGFβ1的抑制剂,通过抑制Ⅰ型及Ⅲ型胶原沉积而起到抗纤维化的作用.硬皮病是皮肤及内脏器官结缔组织的局限性或弥漫性纤维化或胶原纤维进行性硬化,最后发生以萎缩为特点的结缔组织疾病.有研究发现,从硬皮病患者皮肤中分离的成纤维细胞在培养中比正常成纤维细胞合成更多胶原.本实验探究Cthrc1与TGF-β1二者的相互作用及二者对成纤维细胞胶原蛋白合成的影响,以及Cthrc1与TGF-β1在硬皮病和正常组织中的表达情况. 方法：(1)应用重组Cthrc1与TGF-β1处理的成纤维细胞,采用采用羟脯氨酸(HyP)消化法测定经处理的成纤维细胞中Cthrc1与TGF-β1二者对胶原蛋白合成的影响.(2)实验数据用SPSS17.0软件进行统计分析,组间比较用t检验. 结果：经处理的成纤维细胞中羟脯氨酸表达量和空白组相比：PCMV6-XL4-Cthrc1、si-Cthrc1、TGF-β1fator、SB inhibitor、BC组的表达量分别为0.116±0.013μg/ml、0.287±0.032μg/ml、0.322±0.036μg/ml、0.152±0.017μg/m1、0.203±0.018μg/ml,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论：通过羟脯氨酸消化法检测胶原蛋白的合成与表达,研究发现TGF-β1因子能诱导羟脯氨酸合成和表达,而重组的过表达Cthrc1能抑制TGF-β1诱导的上述效应,初步提示Cthrc1可能作为抗纤维化的潜在治疗方法.