Adjudin抑制人精子获能和受精能力及其作用机制

摘要

目的：评价Adjudin对人精子的受精能力及其可能的作用机制.方法：根据WHO(1999)男性学标准,从浙江省精子库获得45例生育男子精液标本.精子获能和顶体反应评价采用CTC免疫荧光染色法;以人精子穿透去透明带仓鼠卵(SPA)鉴定人精子的受精能力;精子活力及其超激活运动(HAM)鉴定采用CASA分析方法;以EIA法测定精子细胞cAMP水平;采用PY、PS和PT抗体免疫测定评价Adjudin是否参与精子获能相关事件——蛋白酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸磷酸化.结果：Adjudin抑制孕酮诱导的精子获能和ZP触发的顶体反应,并呈剂量依赖关系,由此导致精子受精能力明显下降.值得注意的是Adjudin抑制精子获能是一个可逆过程.Adjudin抑制精子HAM,但不影响精子活力;它显著抑制Forskdin激活的跨膜腺苷酸环化酶(tmACs)和HCO3激活的胞内可溶性腺苷酸环化酶(sAC)活性,导致人精子[cAMP]i水平显著下降.此外,Adjudin可明显抑制丝氨酸和苏氨酸蛋白磷酸化,但不能抑制蛋白酪氨酸磷酸化.Adjudin抑制获能和获能相关事件只能在含Cl-培养基中发生,在缺Cl-培养基中不能发挥其抑制作用,提示CI及其通道可能参与精子HAM和获能事件;加入cAMP激动剂dbcAMP既可拮抗Adjudin的抑制作用,亦可克服缺Cl-引起的HAM和获能的抑制作用.结构性C1-通道抑制剂DPC和DIDs均可抑制人精子获能,进一步支持Adjudin可能抑制Cl-/HCO3-交换子的功能.结论：Adjudin是一强有力的结构性Cl-通道家族抑制剂,干扰Cl-功能,从而阻止人精子获能和受精能力.