小鼠孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向诱导分化的研究

摘要

探索使孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向诱导分化的条件,为骨组织工程寻找理想的种子细胞.将建系的孤雌胚胎干细胞在体外稳定培养,通过碱性磷酸酶染色,全能性表面抗原SSEA-1、端粒酶和细胞因子的免疫组化,RT-PCR检测全能性转录因子,孤雌胚胎干细胞体内外分化检测验证KM×129/SV孤雌胚胎干细胞系的全能性.通过向培养液中添加地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C等成骨细胞诱导因子诱导孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向分化,通过RT-PCR检测成骨细胞特异性基因、透射电镜、茜素红、von Kossa染色等方法检测孤雌胚胎干细胞向成骨细胞定向分化的情况.将诱导后的孤雌胚胎干细胞接种于三维支架材料珊瑚上,通过激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上的生长情况.建立的孤雌胚胎干细胞系在体外可以稳定培养并传代，具有与胚胎干细胞相似的全能性，通过直接诱导的方法可以将孤雌胚胎干细胞定向诱导为成骨样细胞。