自分泌运动因子受体mRNA在急性髓细胞白血病细胞株中的表达及意义

摘要

目的：通过检测自分泌运动因子受体(AMFR) mRNA在急性髓细胞白血病(AML)细胞株中的表达,探讨其在AML发病中的作用及其靶向治疗的潜在价值.方法：①以急性髓细胞白血病THP-1细胞株组、HL60细胞株组及K562细胞株组为实验组,以特发性血小板减少性紫癜患儿的骨髓为正常对照组,应用实时荧光定量PCR测定AMFR的mRNA在各组细胞中的相对表达量;②选择THP-1细胞株进行体外培养,以处于指数生长期的细胞为实验对象,采用Santa cruz公司AMFR小干扰RNA(AMFR-siRNA试剂盒)进行转染,并以AMFR-siRNA转染的THP-1细胞为实验组、以转染培养基处理的THP-1细胞为空白对照组、以FICT荧光标记control siRNA转染的THP-1细胞为阴性对照组进行实验,应用实时荧光定量PCR检测转染0h、24h、48h、72h、96h时间点每组细胞AMFR基因表达水平;选择基因沉默效应最明显时间点的各组细胞,应用Annexin V/PI双染法测细胞凋亡、流式细胞术检测细胞增殖周期.结果：AMFR在AML细胞株中存在表达，且在各实验组细胞株中的表达均高于正常对照组(P<0.001);应用AMFR-siRNA转染THP-1细胞株抑制AMFR的mRNA表达，AMFR-siRNA组转染48h时mRNA表达开始下降，72h时mRNA的表达降至最低，实验观察到96h，抑制作用己经明显减弱(p<0.001);选择基因沉默效应最明显的时间点(72h)测THP-1细胞周期，control siRNA组与空白对照组较转染前无明显差异，AMFR-siRNA组在转染72h时，能够将细胞阻断在增殖前期，即GO/G1期细胞比例增加(F=35.491,P<0.001)，S期细胞比例明显下降(F=24.726,P<0.001)，而G2/M期无明显差异(F=0.928,P>0.05);AnnexinV/PI双染后，使用流式细胞仪分析早期细胞凋亡，AMFR-siRNA能够明显促进THP-1细胞的凋亡，AMFR-siRNA组凋亡细胞比例与空白对照组(3.83土0.29%)及control siRNA组，均明显升高(p<0.001)。结论：AMFR在急性髓细胞白血病细胞株中高表达;AMFR-siRNA转染AML细胞株能使AMFR基因沉默，并能抑制细胞增殖和促进细胞调亡，提示AMFR参与了AML肿瘤细胞的恶性增殖，AMFR可能是治疗AML的潜在靶点。