SHH诱导恒河猴MSCs分化为神经样细胞的实验研究

摘要

背景：骨髓间充质干细胞MSC诱导分化为神经细胞，是神经系统疾病细胞治疗的有效手段，但目前的时效尚不完善。 目的：应用神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质下细胞(MSCs)向神经样细胞分化。设计、时间及地点：观察对比试验，于2007-02/2008-06在中山大学眼科中心国家重点实验室完成。材料：1-2周龄恒河猴12只，胫骨粗隆抽取骨髓，诱导分化为神经样细胞。 方法：密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞，倒置相差显微镜观察生长情况，MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞仪鉴定细胞表型，免疫组化鉴定分化细胞标志，透射电镜和扫描电镜观察分化细胞超微结构。 结果：体外分离培养的恒河猴骨髓MSCs，经流式细胞仪表型鉴定，且具有较高均一性。通过SHH诱导方案诱导处理7d后，分化细胞多数表现为NSE、NF-M、Tau和Nestin染色阳性，经图像统计分析发现经SHH诱导方案神经十细胞标志物Nestin阳性率显著高于RA诱导办案(p<0.01)，另一方面经RA诱导方案诱导的细胞表现GFAP阳性率高于SHH诱导方案，二者具有显著性差异(p<0.05)。 结论：实验证实SHH诱导方案是一种诱导恒河猴MSC向神经样细胞分化的有效途径。