合浦珠母贝GTP结合蛋白α亚基的克隆、序列分析及表达分布

摘要

目的:克隆合浦珠母贝GIP结合蛋白亚基，并对其序列及表达分布进行研究。 方法:利用RNAzol从合浦珠母贝外套膜组织中提取总RNA，OligodT作引物进行反转录合成cDNA，并根据不同物种间氨基酸保守区设计简并引物，采用PCR的方法，从cDNA中扩增出目的基因约500bp，将所得基因片段与T载体连接，转化到JM109宿主菌中，挑选阳性克隆，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。分别提取合浦珠母贝外套膜、闭壳肌、生殖腺、腮腺和内脏断组织中的总RNA，并转印至尼龙膜上，利用α-P-dCTP随机引物标记基因探针，进行Northern Blot；同时利用地高辛随机引物标记基因探针，进行组织切片的原位杂交。 结果:克隆出的α亚基片段在GetBank中进行同源搜索，其氨基酸序列与章鱼、蜗牛的a亚基同源性为82％。Northern Blot．结果表明，α亚基在各种组织中的表达分布，由强到弱依次为腮腺、外套膜、生殖腺、闭壳肌和内脏团。 结论:本研究首次报道在合浦珠母贝GIP结合蛋白α亚基基因片段，为进一步研究合浦珠母贝G蛋白介导的信号转导途径及其对生物矿化的调节作用打下了基础。