PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究

摘要

提取伪狂犬病病毒(PrV)SH株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank发表的PrV基因序列(NC-006151,BK001744),选择保守序列设计两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的1075bp左臂片段(L)和936bp右臂片段(R),L和R的拼接片段中TK基因内部缺失498bp.将L片段和R片段克隆于pBluescriptⅡSK载体上,获得转移载体pBLR;提取pBLR质粒,经聚乙二醇纯化后,用磷酸钙转染法与PrVSH株共转染293T细胞,在细胞培养液中有5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下,利用TK143细胞筛选出重组PrVSH毒株:rPrV-SH.测定了rPrV-SH株在细胞上的生长特性、对小鼠的半数致死量.实验结果显示,缺失了TK基因后,其在细胞上的生长状况和病毒的滴度未见明显影响.rPrV-SH株对小鼠的半数致死量比亲本毒株PrVSH高至少22倍,表明rPrV-SH株的毒力比亲本毒有所下降。