连续批分式生物膜接触滤材程式中生物膜采样方法及FISH杂交流程之建立

摘要

本研究目的为建立FISH(fluorescence in situ hybridization)之采样及杂交流程,以利探讨连续批分式生物膜接触滤材程序(sequencing batch biofilm reactor,SBBR)中之微生物量变化情形.探讨杂交流程时,于杂交缓冲液中添加20℅或30℅formamide,可使本研究所使用之Alc、Cory、Aci及Eub338等四支寡核酸探针之杂交时间缩短至3小时.在此条件下,杂交温度为45°C时,可得明显萤光信号.同时,纯菌菌抹片制作时先以PBS(1X)清洗3次再进行固定,可减少杂交背景,使杂交结果更为清晰.而利用直接将采样玻片插入SBBR系统滤材中采集之生物膜玻片,以Eub338探针在上述条件下进行杂交,亦呈现明显之放光反应,显示此插入式采集生物膜样品方法可行.