融合蛋白HSP65-HPV18E7对HPV18阳性肿瘤的治疗与预防效果分析

摘要

目的:建立表达HPV的18亚型E7蛋白的B16F10细胞系,接种到小鼠,并研究融合蛋白和HSP65-HPV18E7对由HPV18亚型诱发的宫颈癌治疗和预防作用。方法:将HPV18E7基因插入到真核表达质粒pcDNA3.1(-)中,重组质粒稳定转染入B16F10细胞株中,经G418多次筛选,得到稳定表达E7蛋白的细胞株,移植于C57BL/6小鼠,建立肿瘤的动物模型。用本实验室保存的表达HSP65-HPV18E7蛋白的大肠杆菌BL21表达菌株,经IPTG诱导表达后菌体经过超声破碎&离心& Q-Sepharose强阴离子交换柱层析和Ni亲和层析等步骤进行纯化,得到HSP65-HPV18E7蛋白,用此样品对荷瘤小鼠进行免疫治疗,考察治疗效果。纯化的样品对C57BL/6小鼠免疫2次后,攻击105个E7阳性的B16F10细胞,观察肿瘤发生率;摸索不同剂量的融合蛋白的治疗效果和预防效果。结果:对于E7阳性的B16F10细胞形成的肿瘤,HSP65-HPV18E7融合蛋白治疗组与PBS对照组有显著差异;但对E7阴性B16F10细胞同样引发的肿瘤,PBS对照组与HSP65-HPV18E7融合蛋白治疗组没有显著差异。预防效果观察中,E7阳性的B16F10细胞注射组,HSP65-HPV18E7融合蛋白能击退40％左右的移植瘤。但E7阴性B16F10细胞注射组,PBS对照组与HSP65-HPV18E7融合蛋白治疗组小鼠全部发生肿瘤,并且不会消退。不同剂量融合蛋白的预防研究中,200ug HSP65-HPV18E7融合蛋白能击退70％移植瘤;200ug HSP65-HPV18E7融合蛋白治疗组小鼠的肿瘤生长也最慢。结论:HSP65-HPV18E7融合蛋白免疫小鼠后激起的免疫反应能很好地抑制HPV18阳性宫颈癌肿瘤的生长和击退移植瘤的建立。