钙释放激活的钙通道(CRAC)介导多壁碳纳米管对Raw264.7细胞迁移的诱导作用

摘要

目的:迁移运动是巨噬细胞的一项重要生理功能,在动脉粥样硬化形成、炎症反应中起重要作用.细胞的运动依赖于Ca2+的参与,而对于巨噬细胞来讲,胞内钙来源于通过钙释放激活的钙通道(CRAC)的钙内流或胞内钙库释放.碳纳米管(CNT)作为一种炙手可热的新兴纳米材料,因其具有较高的稳定性和良好的生物相容性,常作为药物载体系统被应用于生物医学领域.本实验的目的在于探索碳纳米管对小鼠巨噬细胞系Raw264.7迁移的影响,以及在此过程中CRAC可能的角色.rn 方法:用Transwell小室建立细胞迁移的模型.实验分为三组:分别为对照组(control,n=3)，多壁碳纳米管(MWCNT)组,n=3)和CRAC抑制剂组(SK&F组，n=3)，每组在上室接种5X1护个细胞。MWCNT组加入终浓度为50μg/ml的MWCNT，抑制剂组加入相同浓度的MWCNT和CRAC选择性阻断剂SK&F96365.Transwell小室置于孵箱中作用24h后，取出Transwell小室，PBS冲洗，用棉签轻轻擦去微孔膜上层的细胞，用4%多聚甲醛固定微孔膜下层细胞，结晶紫染色后显微镜下计数，取5个视野的细胞均数作为该样本从微孔膜上层迁移至下层的细胞数。rn 结果：与对照组比较，MWCNT组Raw264.7细胞的迁移率显著增加(p＜0.05)，CRAC阻断剂可以明显减少细胞迁移(p＜0.05)，细胞迁移数量甚至降到对照组的水平。rn 结论：CRAC通道在很大程度上介导了MWCNT对Raw264.7细胞迁移的刺激作用。这种效应为进一步研究碳纳米管刺激巨噬细胞迁移的作用及其机制提供了新鲜资料。