DNMT3B mRNA 3'非编码区报告基因载体的构建与功能验证

摘要

目的：构建用于鉴定microRNA靶基因的报告基因系统并进行功能验证,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础.rn 方法：在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)3'非编码区序列,经酶切、测序验证是否插入及正确性.生物信息学分析DNMT3B与miRNA-125b的靶向关系,并用miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性.rn 结果：成功构建了DNMT3B3’非编码区报告基因载体，经酶切和测序鉴定正确;共转染细胞24h后，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性，结果显示与空载体对照组相比，构建载体组荧光素酶活性下降了54.8%(P＜0.001)。rn 结论：成功构建了DNMT3B mRNA3’非编码区报告基因载体，且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。