DNA甲基化对花生四烯酸代谢通路间平衡的影响

摘要

目的：花生四烯酸代谢在内皮细胞功能中起到重要作用,但DNA甲基化对其影响目前鲜有报道.本实验的目的是探索DNA甲基化对花生四烯酸代谢通路间平衡的影响.rn 方法：首先通过预测发现花生四烯酸代谢途径中的部分酶具有可发生甲基化的潜力.随后使用超高效液相色谱LC-MS/MS对经甲基化转移酶抑制剂5-azacytidine（4μm)处理过72h的脐静脉内皮细胞(HLJVEC)进行代谢组学研究，检测细胞及细胞上清中花生四烯酸COX,LOX及CYP450三大代谢通路中的酶促代谢产物(TXB2, PGE2,PGD2,5-HETE,15-HETE,19-HETE,LTA4,LTB4,5,6-/8,9-/11,12/14,15-EET等，共32种)的含量，并且使用QPCR的方法通过对花生四烯酸代谢中的重要酶基因表达的测量进一步解释代谢组学的结果。rn 结果：1、首先预测发现COX通路中有包括PTGDS,TBXAS1,CBR1,CBR3等10个酶，LOX通路有包括GPX1,GPX3,GPX7等8个酶可能受甲基化调控，而CYP450通路只有4个酶可能受甲基化调控。2、与对照组比较，通过LC-MS/MS检测发现S-azacytidine处理组细胞中花生四烯酸代谢谱明显发生变化，其中TXB2(TEXAS 1的代谢产物)，PGE2(PTGES2的代谢产物)，PGD2及PGJ2(PTGDS的代谢产物)和PGF2a(CBRI及CBR3的代谢产物)的含量显著升高:15-HETE(GPX1,GPX3，GPX7)的代谢产物的含量略有增高;11,12-EET及14,15-EET（sEH的代谢产物)的含量降低;而细胞上清中的代谢谱无明显差异。3、与对照组比较，QPCR检测发现5-azacytidine可以显著增高HUVECs中花生四烯酸代谢的关键酶TGXAS1, PTGES2,PTGDS,CBRI,CBR3,GPX1,GPX3,GPX7及sEH的基因表达水平。rn 结论：DNA甲基化通过调控花生四烯酸代谢途径关键酶的表达影响花生四烯酸三大代谢通路间的平衡。