TCDCA对佐剂性大鼠关节炎模型成纤维样滑膜细胞糖皮质激素受体的影响

摘要

目的：牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA)是动物胆汁的主要有效成分之一,具有显著的抗炎、免疫调节作用.本研究旨在深入探讨TCDCA的抗炎与免疫调节作用的分子机制,寻找TCDCA抗佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)作用的新途径.方法：选取SPF级Wistar大鼠,完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)法制备AA模型大鼠;采用组织块培养法分离培养AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞;应用荧光偏振技术(Fluorescence Polarization,FP)检测TCDCA与糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)的竞争结合活性;应用荧光定量PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLSGR mRNA表达的影响;应用蛋白免疫印迹杂交(Western Blot)检测了TCDCA对AA大鼠FLS GR蛋白表达的影响;应用酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)检测TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞PGE2含量的影响.结果：造模后18 ～21d,模型组大鼠双侧足关节及足爪出现较正常鼠明显的肿胀,尾部有明显的结节,提示AA大鼠模型制备成功;FP检测结果显示TCDCA在较低浓度范围内即可抑制荧光标记地塞米松与GR结合;荧光定量PCR结果显示与模型组相比,TCDCA能显著促进AA大鼠成纤维样滑膜细胞GR mRNA的表达(P＜0.05);Western Blot结果显示TCDCA能够促进GR蛋白的表达;ELISA检测结果显示TCDCA对AA大鼠FLS PGE2的分泌呈现抑制作用,而米非司酮(GR特异性阻断剂)预处理组与IL-1β刺激组相比较无显著性差异(P＞0.05).结论：TCDCA通过与GR结合、上调GR的表达,激活GR介导的信号转导通路,抑制AA大鼠FLS炎症介质的分泌,产生抗炎和免疫调节作用,该研究结果为进一步阐明TCDCA对抗AA大鼠急、慢性炎症机制,为GR信号转导通路是否为TCDCA发挥抗炎和免疫调节作用的重要途径奠定了试验基础.