利用CRISPR/Cas9制作T细胞缺失SD大鼠遗传模型

摘要

SD大鼠品系育种、动物实验已在生物医药领域被广泛应用,但SD大鼠基因敲除模型仍极其缺乏,更无免疫缺陷遗传模型.Lck(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase)基因在胸腺的发育以及T细胞的分化和发育中都起着关键性的作用,所以在SD大鼠中敲除Lck基因,即可以获得T细胞缺失的SD大鼠遗传模型.本研究利用CRISPR/Cas9系统原理,在SD大鼠Lck基因外显子中确定了2个特异性打靶位点,通过体外转录得到sgRNA mRNA和Cas9mRNA,并利用显微注射系统将其注射进入SD大鼠受精卵细胞,最终获得了2只F0代Lck基因敲除SD大鼠,对其进行测序检测,发现其中1号大鼠两条染色体分别缺失280和249个碱基,2号大鼠一条染色体缺失70个碱基.经过回交和杂交,获得了Lck基因敲除纯合子SD大鼠,使用流式细胞术对其外周血进行检测,确认其T细胞已经完全缺失,表明Lck基因敲除SD大鼠遗传模型构建成功.本研冗在SD大鼠中利用CRISPR/Cas9系统敲除Lck基因在国内外尚属首次，具有很高的原创性和非常重要的基础研究和实际应用价值，构建得到的T细胞缺失的并可以稳定遗传的SD大鼠动物模型在免疫相关疾病研究中有着重要的意义。