条石鲷促性腺激素β(FSHβ,LHβ)亚基cDNA克隆及表达特性分析

摘要

采用同源性克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了条石鲷GtHβ cDNA序列,并分析了GtHβ mRNA在条石鲷组织中的表达差异和在卵巢发育不同时期的垂体、卵巢、脑中表达水平变化.结果表明:条石鲷FSH cDNA全长554bp,ORF长363bp,编码了120个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽.条石鲷LH cDNA全长857bp,ORF长450bp,编码了149个氨基酸,前24个氨基酸为信号肽.FSH和LH包含了12个保守的半胱氨酸残基(Cys)和一个N-糖基化位点,在LH的第4和第5个Cys之间存在着硬骨鱼类特异性的Cys-Ser-Gly-His(CSGH)区域.同源性比较和进化分析表明,条石鲷FSH和LH与鲈形目鱼类的进化关系较近.采用实时荧光定量PCR法检测发现:FSH和LH mRNA在垂体中的表达量最高,其次是性腺;FSH mRNA在头肾和肾脏中不表达,LH mRNA在头肾中不表达.周期表达分析表明:垂体中的FSH mRNA在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值,LH mRNA在Ⅴ期达到最大值;卵巢中的FSH mRNA在Ⅴ期达到最低值,而LH mRNA在Ⅴ期达到最大值;脑中的FSH和LH mRNA在Ⅴ期达到最低值.激素分析表明,血清中FSH在卵巢发育的Ⅳ期达到最大值,而LH在Ⅴ期达到最大值.血清中FSH和LH水平与垂体中FSH mRNA和LHmRNA表达呈现趋势一致的变化.