牛疱疹病毒1型gE基因在杆状病毒表达系统pFB-LIC-Bse内的表达

摘要

为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH 10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE.将该重组杆粒的DNAE转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒.Westem blot及间接免疫荧光试验(IFA)分析结果显示,重组杆状病毒在SF9中表达了分子量大小约为43 ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与鼠抗His标签单克隆抗体和鼠抗BHV-1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性.本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定基础.