禽流感病毒H5、H7、H9亚型血凝素基因的酵母表达及检测

摘要

利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5、H7及H9型血凝素基因在毕赤酵母中的表达研究.首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经Sac Ⅰ、Bg1 Ⅱ及Sal Ⅰ线性化后电转化GS115感受态细胞,以插入或替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白,并进行了检测.经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达.