单抗介导的小尾寒羊骚痒病免疫组化检测方法的建立

摘要

用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA,并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a(+)上,构建小尾寒羊PrPc核心片段表达重组质粒PrP-pET-32a(+).PrP-pET-32a(+)转化E.coliBL21,IPTG诱导融合表达小尾寒羊PrPc核心片段Trx-PrP27-30.Ni+离子亲和层析柱纯化蛋白,得到相对分子质量约为35kD的Trx-PrP27-30.以纯化的Trx-PrP27-30免疫PrPc基因敲除小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选出6株能稳定分泌针对小尾寒羊PrPc核心片段特异单抗的杂交瘤细胞株2H3、4C6、5F11、7F1、7F8和7F11.免疫组化实验表明,2H3、4C6、5F11和7F11可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrPsc.