人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定

摘要

目的：越来越多的研究表明,斯钙素1I(STC1)和肿瘤的发生发展有关.课题组首次证明了STC1和卵巢癌的发生有关.通过原核表达的方法得到有活性的STC1重组蛋白.rn 方法：将优化合成的斯钙素1(STC1)的DNA片段克隆到表达载体pET-32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,在变性条件下纯化包涵体,经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白.Western blot验证目的蛋白免疫活性.动物实验检测目的蛋白的生物学活性.rn 结果：构建了pET-32b(+)-STC1表达载体，表达并纯化了STCI融合蛋白包涵体，经复性后、凝血酶切和纯化后获得可溶的目的蛋白。Westem blot验证正确。生物学活性检测表明重组STC1蛋白能增加大鼠排泄系统对磷酸盐的重吸收。rn 结论：获得了具有生物学活性的斯钙素1重组蛋白，为制备STCl单克隆抗体和进一步研究STC1与肿瘤治疗的关系奠定了基础。