胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因部分缺失突变株的构建

摘要

鉴于胸膜肺炎放线杆菌(APP)ApxⅠA毒素蛋白N端功能区为免疫原性位点,而C端功能区与毒素活性相关,因而本试验拟通过缺失ApxⅠA毒素C端功能区,构建保留毒素免疫原性且毒素失活的突变菌株.根据发表的apxⅠ基因序列设计2对引物用于扩增apxⅠA基因C端上游约1.8 kb及下游约1.7 kb的基因片段,同时自质粒pACYC184中扩增约1.1 kb的氯霉素抗性基因片段,经克隆测序后将上述基因片段串联并插入pUC19的相应位点,构建转移载体pUIA-Chlr,将转移载体经电转化导入APP血清10型野生菌株中发生同源重组,筛选获得突变菌株.利用PCR和Southern Blotting对突变菌株进行了鉴定,并对该突变菌株生物学特性进行了分析.结果表明,该突变菌株可正常增殖,但无溶血性,仅能表达ApxⅠA毒素N端约48 kDa的蛋白,对小鼠的毒力降低100倍以上,连续传代后插入的氯霉素抗性基因能够稳定遗传,突变菌株免疫仔猪后对同种血清型和不同血清型菌株的攻毒均可显著降低死亡率和肺损伤程度,提示该突变菌株具有较好的交叉保护活性.该突变菌株的构建为研制具有交叉保护活性的胸膜肺炎放线杆菌减毒活疫苗奠定了基础.