猪传染性胸膜肺炎放线杆菌1型与5型差减文库构建及差异基因分析

摘要

目的:建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型与5型差减文库,克隆差异表达基因并分析筛选不同血清型间免疫保护相关基因.方法:采用cDNA代表性差异分析法(cDNARDA),通过三轮消减杂交后获得特异性差异表达基因,克隆入PGEM-T载体,建立差减基因文库,随机挑选120个克隆子进行测序,获得的不同的差异表达基因序列,应用DNAMAN软件进行差异基因序列分析.经DNA印迹证实后,采用Internet blast软件进行差异表达基因片段与Genebank已知序列的同源性分析.结果:建立了APP 1型针对5型差异表达基因的差减文库和APP 5型针对1型差异表达基因的差减文库.获得了21个APP 1型特有的差异表达cDNA片段和37个APP 5型特有的差异表达cDNA片段,大小在500bp-100bp之间.与GenBank已知序列同源性比较分析,其中22个为未知基因.结论:成功构建了APP 1型和APP 5型的差异表达基因文库,成功建立了不同血清型细菌间差异表达基因的筛选技术,为研制针对多种血清型病原的广谱新型基因疫苗提供了新的方法.