定点突变法获得放线菌酮抗性基因

摘要

本研究根据产朊假丝酵母L41基因序列，设计四条引物，以产朊假丝酵母基因组DNA为模板，利用套叠PCR和高保真聚合酶将L41基因第五十六位脯氨酸密码了突变为谷氨酰胺密码子，即可获得放线菌酮基因，为产朊假丝酵母转化体系的建立奠定良好的基础。研究中采用Pyrobest DNA Polymerase进行PCR扩增，其特点为可信度极高，而且与Taq DNAPolymerase具有相同的扩增效率。与Taq DNA Polymerase相比，即使不用Hot start法，非特异性带也可得到有效的控制，尤为重要的是，因为其具备3'-5' Exonuelease活性，在PCR扩增产物的3端不加碱基A，这使得套叠PCR大大提高了准确性。