五步蛇毒类凝血酶的性质测定

摘要

经过一步亲和层析和一步离子交换层析,从五步蛇毒分离出了一个类凝血酶。这个蛋白酶在还原SDS-PAGB分析中表现出的分子量为～40kD,在MALDI-TOF-TOF-MS分析中则显示为～34 kD.不同于其他的蛇毒类凝血酶,这个蛋白酶只能被三氟甲磺酸(TFMS)脱糖而不能被N-glycosidase F(PNGase F)水解。经实验分析,这个蛋白酶含有～6kD的O-linked糖链,其等电点为～4.8±0.2。这个酶在pH 9时显示出最大自身降解程度和以BAEE为底物的精氨酸酯酶活性,在～50℃其水解能力最强,而且能被Aprotinin, PMSF, AEBSF和Benzamidine等抑制。同时,它也显示除了人纤维蛋白原凝结活性和以DL-BAPA为底物的精氨酸酰酶活性。氨基酸组分测定,N端15个氨基酸测序以及肽指纹图谱分析显示,这个蛋白和其他蛇毒中的类凝血酶有较高的同源性。