志贺菌流行性分析和超广谱β-内酰胺酶基因型研究

摘要

目的：分析浙江省部分地区志贺菌流行现状、耐药性和超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-lactamases, ESBLs)的基因型。方法 收集萧山妇幼保健医院、绍兴市人民医院的24株志贺菌,用血清凝集试验进行血清分型;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对收集到的志贺菌进行同源性分析;琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC);纸片确证实验筛选产ESBLs菌株并进行接合实验,接合前后菌株进行等电聚焦电泳(IEF)分析;用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-9组的特异性引物,PCR扩增β-内酰胺酶基因,并对PCR产物进行DNA测序分析。结果 24株志贺菌中11株为福氏志贺菌,以F4血清型为主,占81.8﹪,13株为宋内志贺菌。PFGE结果显示,来自萧山的11株福氏志贺菌中9株F4型为同一克隆株。来自绍兴的5株宋内志贺菌和来自萧山的8株宋内志贺菌分属于同一型的4个不同亚型。24株菌株中对庆大霉素和氨苄西林的耐药率较高,均为95.8﹪,对头孢噻肟的耐药率为20.8﹪,中介率达20.8﹪;其中对含酶抑制剂抗生素哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的中介率均高于25﹪。检测到10株产ESBLs菌株,福氏志贺菌的ESBLs检出率为18.2﹪,宋内志贺菌的ESBLs检出率为61,5﹪,均接合成功。IEF显示产酶菌株产生等电点为7.9或9.0的β-内酰胺酶。PCR扩增产物经测序,并在核苷酸序列库(GenBank)中对比分析,等电点为7.9的β-内酰胺酶为CTX-M-14型ESBLs,而等电点为9.0的β-内酰胺酶为CTX-M-15型ESBLs。结论 萧山的福氏志贺菌为同一克隆株的流行,而宋内志贺菌不同地域为不同亚型的流行。志贺菌中由可接合质粒介导的CTX-M型超广谱β-内酰胺酶是引起多种β-内酰胺类抗生素耐药和敏感性降低的主要原因。并首次在国内宋内志贺菌中检测到CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶。