稳定分泌抗PRV及抗PRRSV单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

摘要

从河南省某些发病猪场分别分离到一株狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了鉴定。利用自行分离的PRV和PRRSV作为混合抗原,免疫小鼠后用一次融合、分别筛选的方法,获得了能分别稳定分泌抗2种抗原的单抗杂交瘤细胞株.其中2株抗PRV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,3株抗PRRSV的单克隆抗体杂交瘤细胞株.其免疫球蛋白均为IgG2.分泌的抗PRV单克隆抗体与AIV、NDV、PPV、PRRSV、LPS、IBDV无交叉反应；分泌的抗PRRSV单克隆抗体与AIV、NDV、PRV、PPV、IBDV无交叉反应；表明所选杂交瘤细胞株特异性较高。抗PRV的单抗上清和腹水效价均值分别达到1:3200、1:102400以上；抗PRRSV的单克隆抗体杂交瘤细胞株的培养上清和腹水效价分别达到1:3200、1:51200以上。这两种杂交瘤细胞分泌的抗体均有良好的热稳定性。腹水经辛酸硫酸铵纯化后,蛋白含量分别为105.89 mg/mL、112.49mg/mL.此两种单克隆抗体的获得为猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征的研究及快速诊断方法的建立提供了工具. 与用单一纯化抗原免疫小鼠的传统方法相比,本研究建立的混合免疫、分别筛选方法,仅一次免疫、一次融合就可选出分别分泌两种抗不同抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,是一种建立杂交瘤细胞株的高效方法,不但节约实验材料、降低了成本,而且节省了时间和人力,大大提高了建立杂交瘤细胞株的工作效率。原来需要两个或更多人才能完成的工作,现在一个人就可以完成。这对杂交瘤技术的学术研究和实际应用均具有重要意义。 利用自行制备的抗PRRSV单克隆抗体建立了单抗介导双夹心间接ELISA对PRRS抗原检测的实验方法,可以用来检测病料组织及细胞培养物中的PRRSV.但该方法不能区分强毒株和疫苗毒.尽管如此,该方法对于PRRSV非免疫发病猪群、疫苗毒或强毒培养物等的检测仍具有重要参考价值。