传染性胸膜肺炎放线杆菌apxIIC-/kanr+基因缺失减毒株的构建及生物学特性鉴定

摘要

重组转移载体pBSKA通过电转化导入亲本菌传染性胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌(APP-7)WF83株，电转化后的产物涂布于TSB/Kan平板，1-2d可获得突变株。卡那霉素抗性试验证实突变株有卡那霉素抗性；NAD依赖性试验证实突变株依赖NAD生长；PCR鉴定证实了卡那霉素抗性基因置换了apxIIC基因，并证实突变株中无pBSKA质粒的存在；溶血活性试验证实突变株完全失去了溶血活性；细胞毒性试验证实突变株的细胞毒性完全丧失；对小鼠的安全性试验证实突变株的毒力显著减弱，突变株对小鼠是安全的。遗传稳定性试验证实突变株在体外连续传30代或在体内传10代不会发生卡那霉素抗性的丢失。这表明我们所构建的基因缺失减毒株是成功的，为进一步以此突变株作为基因工程弱毒活疫苗株的研究奠定了一定的基础。