基于TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR对DPV弱毒在家鸭体内侵染、增殖和排泄规律的研究

摘要

探讨鸭瘟弱毒苗在不同途径免疫鸭体内侵染、增殖和排泄规律，鸭病毒性肠炎病毒（DEV）弱毒Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后，应用TaqMan-MGB 探针实时荧光定量PCR（FQ-PCR）对实验鸭免疫后第10、30、60、90分钟、第12、24小时和第6、9、12、21、36、60天的心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊、哈德氏腺、回盲处、血液、气管、气管分泌液、食管及其分泌液、十二指肠、空肠、回肠、肓肠、直肠及各肠段分泌液中DEV-DNA拷贝数（以对数值表示）进行检测。结果显示：不同途径免疫DEV弱毒苗均可在免疫后第60分钟内分布于重要免疫器官，其中皮下免疫DEV弱毒苗分布最迅速，DEV-DNA拷贝数最高。免疫后第60分钟至12小时，DEV弱毒苗可在所有免疫鸭受检组织中检出（25/25）。其中口服和滴鼻免疫DEV弱毒苗均较皮下免疫更为迅速分布于机体消化道组织及其分泌液。所有免疫鸭心、脑、十二指肠、盲肠中的DEV-DNA拷贝数均显著大于其它受检组织器官(P<0.05)。免疫后第60分钟至第6天时，各受检组织器官中DEV-DNA拷贝数达到最高值后开始持续降低，至第60天时，依然可在包括免疫器官在内的多个组织器官中检出DEV-DNA。研究表明，DEV弱毒苗在各组织器官中的分布增殖规律与免疫的途径、鸭的解剖结构密切相关。免疫鸭于免疫早期在包括主要免疫器官、消化道和呼吸道黏膜在内的各组织器官中DEV数量的迅速增加是DEV弱毒苗迅速产生系统免疫和局部黏膜免疫力的主要原因。