鸡IL-18成熟蛋白基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及表达

摘要

长期以来，大肠杆菌表达系统成功表达了多种蛋白，但作为原核表达系统，缺少真核生物蛋白翻译后修饰和加工等功能；同时，表达的蛋白多以包涵体形式存在，需要经过复杂的复性才能恢复构象和活性；而且背景蛋白很多，纯化麻烦；表达量一般不是很高。Bruel C等研究表明哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统虽能够表达结构复杂的真核细胞蛋白成分，但操作复杂，表达水平低，产业化生产不易推广使用。而毕氏酵母表达体系是近年来开发应用的真核表达系统,它既有原核生物的特点，又有真核生物的特点，可使外源基因进行正确的翻译和翻译后加工，表达的蛋白具有与体内相似的天然构象，如蛋白质的糖基化、二硫键的形成及蛋白的正确折叠等；含特有的AOX1启动子且带有指导分泌的α信号肽序列，构建的分泌型载体，较易进行胞外诱导表达,简化了纯化步骤；可在适当的条件下使外源性蛋白获得较高表达量，且转化子能够非常稳定地表达外源蛋白，更适应工业化生产，是一种非常理想的表达系统。本研究通过构建分泌型表达载体pPICZαA-ChMIl18，使ChMIL-18整合到酵母染色体中，实现了ChMIL-18成熟蛋白基因在毕赤酵母中的高效表达，为进一步研究ChIL-18的生物学特性奠定了基础。