猪脑心肌炎病毒非结构蛋白2C的原核表达及其反应原性

摘要

以重组质粒pGEM-T-2C为模板，通过RT-PCR扩增得到了猪脑心肌炎病毒（EMCV）非结构蛋白2C基因。将2C 基因定向克隆进原核表达载体pGEX-6P-1中，构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-2C，并将其转化大肠杆菌BL-21感受态细胞，经0.1 mmol/L IPTG 诱导后，成功表达了62 kDa预期大小的目的重组蛋白。Western Blotting分析表明，表达的2C重组蛋白可以分别被猪源或兔源抗EMCV阳性血清识别；以浓度为0.5μg/mL的重组蛋白包被聚苯乙烯微量反应板，能够特异性地检测到猪抗EMCV抗体。表达的EMCV重组非结构蛋白2C具有良好的反应原性，可以替代EMCV全病毒，为进一步研究安全、特异、敏感的基于重组诊断抗原的猪脑心肌炎血清学检测技术奠定了基础。