犬α1干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究

摘要

亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A，构建成转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacI酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后,利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE检测结果表明表达产物为分子量约为27kDa，比其推导结果（约19kD）大，推测可能是发生了糖基化。酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性，约为1.45×106U/mL，蛋白含量约为96mg/L，比活为1.49×107U/mg。重组CaIFN-α的生物学活性具有较强的种属特异性，在MDCK细胞上具有很高的抗病毒活性，在CEF细胞上活性较低，而在F81和MDBK细胞上几乎没有抗病毒活性。进一步研究发现，重组犬α1干扰素对犬瘟热病毒和伪狂犬病毒在MDCK细胞中增殖的具有显著的抑制作用。