猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定

摘要

根据猪瘟病毒衣壳蛋白C基因序列设计一对引物，RT-PCR扩增获得编码猪瘟病毒衣壳蛋白的C基因片断，将其插入到含有葡萄球菌核酸酶SN基因的真核表达载体pcDNA-SN中，筛选获得重组质粒pcDNA-C-SN。脂质体转染猪肾细胞（PK-15）48h后，通过RT-PCR和免疫印迹鉴定表达的融合蛋白，体外DNA消化试验检测核酸酶活性。结果表明，融合蛋白C-SN在PK-15细胞中获得了稳定表达，表达的融合蛋白能够被抗猪瘟病毒多抗所识别，并具有良好的核酸酶活性，能够对DNA进行切割。同时，转染后的PK-15细胞系中表达的融合蛋白C-SN能够有效抑制猪瘟病毒的增殖，使其感染性降低102-103倍。这些结果为进一步将衣壳蛋白靶向病毒灭活策略应用于抵抗猪瘟病毒感染奠定了基础。