hBDNF-GFP基因转染神经干细胞治疗视神经损伤的实验研究

摘要

目的：探讨转染hBDNF-GFP基因神经干细胞体内移植后在视神经损伤大鼠视网膜内的存活、迁移和分化情况,以及其对视神经损伤后视网膜神经节细胞(Retinal ganglion ceil,RGC)存活的影响。rn 方法：(1)取30只SD大鼠制作右眼视神经部分损伤模型,随机平均分成2组,分别于玻璃体腔内移植GFP基因转染神经干细胞(GFP-NSCs)和hBDNF和GFP双基因转染神经干细胞(hBDNF-GFP-NSCs)。8周后处死大鼠,取右眼眼球做冰冻切片,然后分别用Thy1.1、GFAP、β-tubulin、Rhodopsin抗体进行免疫标记,观察移植细胞的迁移分化情况。(2)取30只大鼠制作右眼视神经部分损伤模型,随机均分入3组:损伤组、GFP组、BDNF组。损伤组大鼠玻璃体腔内注射生理盐水,而GFP组、BDNF组则分别于玻璃体腔内移植GFP-NSCs和4hBDNF-GFP-NSCs,每只眼球玻璃体腔内移植5×10个细胞。8周后处死大鼠,取右侧眼球视网膜铺片,行Thy1.1免疫荧光染色后,荧光显微镜下观察计数RGCs细胞数量。rn 结果:rn (1)移植后,两组细胞均可在视网膜内存活、迁移,并产生细胞分化,两组细胞均可以分化成胶质细胞、神经元。移植hBDNF-GFP-NSCs组少量细胞分化为节细胞样细胞(Thy1.1+),而GFP-NSCs组未发现有分化为Thy1.1阳性细胞。rn (2)视网膜铺片Thy1.1免疫荧光染色后计数发现,移植hBDNF-GFP-NSCs的视网膜神经节细胞为146122+154个/mm,明显多于移植GFP-NSCs组1244+187个/mm。(P＜0.05)rn 结论：移植hBDNF-GFP-NSCs后,可以分化为神经元和胶质细胞,少数可分化为视网膜神经节样细胞。hBDNF-GFP-NSCs移植可以增加视网膜神经节细胞的存活数量,有助于视神经损伤后的修复。