使用LAMP技术快速检测单增李斯特氏菌

摘要

单核细胞增生李斯特氏菌是食品卫生上重要的病原菌。它广泛存在于自然界，可导致人和动物腩膜炎、流产、败血症等，病死率高达30％～70％，是目前人类最重要的食物源性病原菌之一。WHO将其列为90年代食品中四大致病菌之一。由于该菌生长温度范围较广，在4℃～6℃的冷藏情况下能较快生长和繁殖，引起冷藏食品包括冷藏肉品严重污染。因此，该菌具有较大的危险性。 环介导等温扩增(loop－mediated isothermal amplification，简称LAMP)是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶，在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。该技术在1h内能扩增出109靶序列拷贝，扩增产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段的混合物。LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便等优点，在核酸的科学研究、疾病的诊断和转基因食晶检测等领域得到了日益广泛的应用。 本研究使用商品化LAMP试剂盒，分别对本实验室保存的菌种进行检验,LAMP技术可以将单增李斯特菌与沙门氏菌、大肠杆菌O157与李斯特菌属其它细菌很好地区分开来。2008年5-7月，利用LAMP检验进口冻肉279批，初筛检出7批阳性。对LAMP检测阳性的可疑样品，将其对应的半Fraser液体培养基于取0.1mL加入10mL FRASER肉汤，于30℃度温育24h。然后把增菌液接种于CHRO MAGAR李斯特菌显色培养基，分离细菌，按照GB4-789.30－2003进行生化鉴定，最后确认检出单增李斯特氏菌7批，与初筛结果完全一致，准确率达100％，说明该试剂盒检测结果准确可靠。