抗无色孔雀石绿抗体的制备及鉴定

摘要

目的：利用本实验室合成的人工抗原制备抗无色孔雀石绿抗体，其中包含多克隆抗体和单克隆抗体两种形式，并进行相关鉴定，为建立免疫分析法检测无色孔雀石绿打下基础。rn 方法：以无色孔雀石绿-卵清蛋白偶联物为免疫原免疫新西兰大白兔，经1次基础免疫和4次加强免疫，收集抗血清，采用饱和硫酸铵法进行纯化，获得了抗无色孔雀石绿多克隆抗体。同时免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞，通过细胞融合，杂交瘤筛选，克隆和扩大培养，成功筛选出一株稳定分泌特异性抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞株。rn 结果：间接ELISA法检测抗无色孔雀石绿多克隆抗体效价达1:2×105。获得的抗无色孔雀石绿单克隆抗体效价为320000，亲和常数为3.25×108 L/mol，亚类类型为IgG2。间接竞争ELISA结果显示，抗无色孔雀石绿单克隆抗体的半数抑制浓度IC50为23.9 μg/L，最低检出限为1.1 μg/L。交叉反应结果表明，单克隆抗体的特异性较好，与孔雀石绿的交叉反应率为24.33％，与其他结构类似物基本无交叉。rn 结论：本文制备的抗体可用于建立无色孔雀石绿的免疫分析方法，经过进一步技术开发，可以形成试纸条、酶免试剂盒和生物传感器等产品，具有广阔的应用前景。