BSA作为动物源性医疗器械细胞免疫检测阳性对照物的研究

摘要

目的：本研究参照ISO10993-20《医疗器械免疫毒性实验原则和方法》以及ASTM相关标准，如ASTMF1905-98《材料致免疫毒性测试方法选择标准规范》等，通过淋巴细胞增殖试验对BSA作为细胞免疫检测阳性物的相关技术问题进行了初步的研究，包括免疫剂量，免疫方式、取材时间等。方法：①实验动物:雌性BALB/c小鼠,8周。②免疫方式及免疫剂量：皮下注射高、中、低三个剂量的BSA(1000、500、100μg/mL)或BSA与佐剂等量混合物，免疫2-3次，每次间隔2周。③淋巴细胞增殖试验：于不同时间点无菌取脾，分离脾细胞，进行淋巴细胞增殖实验。结果:①以BSA单独免疫小鼠，各剂量组OD值与阴性对照组比较差异均无统计学意义。②以BSA混合佐剂免疫小鼠，中、高剂量组OD值明显高于阴性对照组(p<0.05),且呈一定的剂量相关。③2次免疫后2周、3次免疫后2周BSA混合佐剂组OD值均明显高于阴性对照组(p<0.05)。结论：将BSA与弗氏佐剂等量混合，以剂量为50-100μg/只的BSA注射至小鼠皮下，每次间隔2周，二次或三次免疫后2周取材行淋巴细胞增殖试验可获得明显的阳性结果。